Dans le domaine du diagnostic moléculaire, la réaction en chaîne par polymérase (PCR) a longtemps été considérée comme la référence en matière de détection des acides nucléiques. Ces dernières années, les technologies d'amplification isotherme, représentées par l'amplification par recombinase polymérase (RPA), ont attiré une attention croissante en raison de leur rapidité, de leur simplicité et de leur adéquation aux tests sur site.
Bien que la PCR et la RPA soient toutes deux des méthodes d'amplification des acides nucléiques, elles diffèrent considérablement dans leurs principes de fonctionnement, leurs exigences en matière d'équipement et leurs scénarios d'application, ce qui rend chaque technologie adaptée à différents besoins de diagnostic.
1. Principes de base : cyclage thermique et amplification à température constante-
La PCR est un processus biochimique capable d'amplifier une seule molécule d'ADN en des millions de copies en peu de temps. La réaction repose sur des cycles thermiques répétés et comprend trois étapes principales :
1.Dénaturation (90–95 degrés) – L'ADN double -brin est séparé en simples brins.
2. Recuit (55 à 65 degrés) – Les amorces se lient aux séquences cibles.
3.Extension (72 degrés) – L’ADN polymérase synthétise de nouveaux brins d’ADN.
Grâce à ces cycles-à température contrôlée, l'ADN cible est amplifié de manière exponentielle avec une grande précision. Cependant, la PCR nécessite des instruments de cycle thermique complexes et prend généralement 1 à 2 heures.
En revanche, le RPA fonctionne à une température constante de 37 à 42 degrés, permettant une amplification rapide des acides nucléiques sans cycle thermique. La technologie repose sur l'action coordonnée de protéines recombinase, de protéines de liaison à l'ADN simple brin-et d'ADN polymérase à déplacement de brin-pour obtenir une amplification cible hautement spécifique dans des conditions isothermes.
L'ADN polymérase utilisée dans la RPA a une activité de déplacement de brin mais manque d'activité exonucléase 5' → 3'. Pendant l'amplification, les amorces externes s'étendent le long du brin matrice. Lorsqu'elles rencontrent des régions double-synthétisées à partir d'amorces internes, la polymérase ne peut pas dégrader le brin en aval et le déplace, générant de nouveaux produits d'amplification.
L'ensemble de la réaction s'effectue à température constante, ce qui élimine le besoin d'instruments complexes et permet de véritables tests-sur le point de soins-et sur le terrain-. En incorporant la transcriptase inverse, la RPA peut également être appliquée à la détection de cibles ARN.
Les résultats de l'amplification peuvent être analysés à l'aide de plusieurs formats de lecture, notamment la détection des points finaux, la surveillance de la fluorescence en temps réel-, les tests à flux latéral, et peuvent être davantage intégrés aux systèmes CRISPR-Cas, à la microfluidique ou au séquençage de nouvelle-génération (NGS) pour le développement de tests avancés.
Scénarios d'application : tests de précision en laboratoire et tests rapides sur-site
La PCR est devenue l’une des technologies de diagnostic moléculaire les plus précieuses et reste la référence en matière de tests d’acide nucléique.
Grâce à sa grande précision, sa rentabilité-et son évolutivité, la PCR est largement utilisée dans les diagnostics cliniques, les laboratoires centralisés, les instituts de recherche et les programmes de dépistage-à grande échelle, où l'infrastructure et le personnel formé sont facilement disponibles.
La RPA, en revanche, offre des avantages évidents en matière de diagnostics rapides sur site. Avec une amplification réalisée en seulement 20 minutes, des exigences d'équipement minimales et un fonctionnement simple, le RPA est parfaitement adapté.
- Soins de santé primaires et services d’urgence
- Inspection douanière et frontalière
- Dépistage sur le terrain des maladies animales et végétales
- Tests environnementaux et de sécurité alimentaire
Lorsqu'il est combiné avec des appareils portables et des bandelettes à flux latéral, le RPA permet des tests moléculaires rapides et fiables en dehors des laboratoires traditionnels.
MIRA (Amplification Rapide Isothermique Multienzymatique)est la technologie d'amplification isotherme exclusive d'Amp Future. Il appartient à la même famille technique que le RPA et s’inspire des mécanismes naturels de recombinaison et de réparation de l’ADN, utilisant plusieurs enzymes fonctionnelles pour obtenir une amplification rapide des acides nucléiques à température constante.
MIRA utilise un système coordonné de cinq enzymes clés, dont l'hélicase, la recombinase, la protéine de liaison à l'-ADN simple brin- et l'ADN polymérase, pour permettre :
- Large plage de températures de fonctionnement : 25 degrés à 45 degrés
- Amplification rapide : résultats en 20 minutes
- Haute sensibilité et spécificité
- Sécurité améliorée et risque de contamination réduit
MIRA est une technologie d'amplification d'acide nucléique spécialement conçue pour de véritables tests sur-site et-de-services.
S'appuyant sur la plateforme MIRA, Amp Future a développé une gamme complète de produits pour le POCT moléculaire rapide, notamment :
Agent de libération rapide d'acide nucléique :
L'acide nucléique amplifiable est obtenu en 5 minutes à température ambiante ; faible inhibition, permettant un chargement complet de l'échantillon jusqu'à 50 μL ; transport et stockage à température ambiante, aucune protection contre la lumière n'est requise.
Réactif d'amplification d'acide nucléique isotherme :
Amplification réalisée en 5 à 20 minutes, rapide et efficace ; diverses formes de réactifs (poudre lyophilisée, microsphères lyophilisées, etc.) ; diverses méthodes de présentation des résultats (électrophorèse, fluorescence, bandelettes réactives).
Appareils portables miniaturisés :
Détecteurs isothermes numériques, outils de test-de poche, faciles à tenir dans une main, équipés d'une batterie externe, vous libérant des contraintes du laboratoire et permettant des tests précis d'acide nucléique sur le terrain.
Bandelettes de test simples/multiples :
Optimisé sur la base de la méthodologie MIRA pour une meilleure compatibilité ; combiné à la technologie MIRA, mettant en valeur la commodité.
Analyseur d'amplification d'acide nucléique entièrement automatisé :
Nécessite une seule opération de chargement d’échantillon pour une détection entièrement automatisée ; limite de détection jusqu'à une seule copie ; l'amplification isotherme et le bouchage automatique réduisent le risque de contamination.
Forfait de test rapide sur-site :
Tests sur-sur place-, à tout moment et en tout lieu, le tout dans un seul package ; termine les tests en 30 minutes, précis et sensible.
Pour plus d’informations sur les produits ou des solutions, n’hésitez pas à nous contacter.