Staphylococcus haemolyticus est une bactérie à Gram-positive coagulase négative qui est très fréquente dans les hôpitaux. Ces dernières années, les infections acquises à l'hôpital ont reçu une attention croissante en raison de leur risque plus élevé. Staphylococcus haemolyticus peut provoquer davantage les infections cutanées, la méningite, la péritonite et même la septicémie. Les retards dans le diagnostic clinique peuvent entraîner une aggravation de l'état de santé, donc le diagnostic rapide de S. hémolytique est essentiel pour un traitement précis.
L'équipe de recherche de l'enseignant Ji Tuo du département de laboratoire central du deuxième hôpital populaire de Lianyungang, en Chine, a publié un article "Une détection rapide et visuelle de Staphylococcus haemolyticus dans des spécimens cliniques avec Mira-LFS" dans le journal "Analytica Chimica Acta", avec un facteur d'impact de 6,2.
1.Répreuve de recherche
Dans cette étude, une méthode MIRA-LFS basée sur le gène MVAA a été établie pour détecter Staphylococcus hémolytique. La technologie d'amplification à l'acide nucléique rapide multi-enzymatique Mira a été combinée avec une bande de test de flux latérale LFS pour obtenir une détection rapide des agents pathogènes.
L'expérience a été menée à 37 degrés et les résultats ont pu être détectés dans les 9 minutes. La sensibilité de détection était 0. 147cfu / réaction.
La méthode de détection MIRA-LFS convient à la détection du point fixe de Staphylococcus hémolyticus dans les échantillons cliniques, réalisant la méthode POCT pour identifier Staphylococcus hémolytique, qui est d'une grande valeur pour le diagnostic et le traitement rapides dans les zones avec des services médicaux sous-servis.
L'équipe de recherche a utilisé Mira-LFS, qPCR et des méthodes de culture bactérienne traditionnelles pour analyser 95 échantillons cliniques aléatoires et confirmé l'applicabilité clinique.
2. Méthodes de recherche
Le diagramme schématique de la détection de Mira-LFS est illustré ci-dessus.
La recherche a utilisé le kit d'amplification rapide isotherme rapide de l'ADN-Future Biotech de Biotech (Type d'essai en or colloïdal) et les bandes de test de détection de l'acide nucléique.
La longueur d'amorce du gène MVAA est 30-35 les nucléotides, et la longueur du produit d'amplification est 100-350 BP. Au total, 6 paires d'amorces candidates ont été conçues. L'analyse MIRA a été réalisée en utilisant de la GDNA des souches staphylococcus hémolyticus, des amorces candidates ont été dépistées et les produits d'amplification ont été affichés en utilisant une électrophorèse sur gel d'agarose à 2%.
Concevez ensuite la sonde en fonction de la séquence d'amorce avant (s'étendant 16 pb vers l'arrière). L'extrémité 5 'de la sonde a été étiquetée avec FITC et l'extrémité 3' a été étiquetée avec le blocage C3. Utilisez du THF pour remplacer les 31 nucléotides dans la sonde. Le THF est de 30 pb de l'extrémité 5 'et de 15 pb de l'extrémité 3'. L'extrémité 5 'de l'amorce inverse sélectionnée est marquée avec de la biotine.
De plus, l'équipe de recherche a optimisé les conditions de réaction pour la détection Mira-LFS de Staphylococcus hémolyticus. Testez à 37 degrés à des intervalles de 2 minutes de 4 à 12 minutes. Les résultats sont affichés à 8 minutes de temps de réaction et la ligne de test est clairement visible. De plus, des tests sont effectués à des intervalles de 5 degrés à partir de 22-52. 37-42 Degré est la température la plus appropriée pour la détection Mira-LFS. Par conséquent, le temps de réaction optimal et la température de la méthode MIRA-LFS pour Staphylococcus hémolyticus sont respectivement de 8 min et 37 degrés. Avec le résultat final visualisé par LFS en 1 minute, le temps de détection total est de 9 minutes.
3. Résultats expérimentaux
Vérification de la sensibilité
Le test MIRA-LFS a été effectué sur différentes concentrations d'ADN génomique (GDNA) obtenues à partir de cultures de Staphylococcus hémolytique diluées en série (1 {3}} ^ {2}} ^ 0 CFU / ML).
L'analyse de régression de l'unité probabiliste a montré que la LOD à 95% déterminée par le test MIRA-LFS était 0. 147 CFU / réaction.
Vérification de la spécificité
En analysant 18 souches microbiennes pathogènes courantes et 15 souches cliniques de Staphylococcus hémolytique, la sélectivité de la détection Mira-LFS de Staphylococcus hémolytique a été déterminée. Les résultats ont montré que le test MIRA-LFS était négatif pour 18 autres bactéries pathogènes et positives pour 15 échantillons cliniques vérifiés de Staphylococcus hémolytique.
La détection de Mira-LFS est très sélective et adaptée au dépistage de Staphylococcus hémolytique.
Test d'échantillons réels
L'hôpital de Lianyungang Second People a collecté au hasard 95 échantillons, dont 35 échantillons de peau et de tissus mous, 16 échantillons d'urine, 14 échantillons d'expectorations et 30 échantillons de sang.
Les résultats ont montré que la méthode de détection était cohérente à 100% avec la méthode qPCR. De plus, par rapport à l'étalon-or (GB / T4789. 11-2003), la sensibilité et la spécificité de la méthode de détection MIRA-LFS pour identifier l'infection de Staphylococcus hémolytique étaient respectivement à 100% et 98,73%. Ces résultats ont en outre vérifié la faisabilité technique de cette méthode dans la détection de Staphylococcus hémolytique dans des échantillons cliniques.
La méthode MIRA-LFS est utilisée pour la détection rapide POCT de Staphylococcus hémolyticus. Il est efficace, précis, simple et à faible coût, et aide à prendre des décisions de diagnostic et de traitement rapides.
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